影響反應(yīng)因素較多，特別是固相載體的包被難達(dá)到各個(gè)體之間的一致，因此在定量測(cè)定中，每批測(cè)試均須用一系列不同濃度的參考標(biāo)準(zhǔn)品在相同的條件下制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。測(cè)定大分子量物質(zhì)的夾心法ELISA試劑盒，標(biāo)準(zhǔn)曲線的范圍一般較寬，曲線點(diǎn)的吸光度可接近2.0，繪制時(shí)常用半對(duì)數(shù)紙，以檢測(cè)物的濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，將各濃度的值逐點(diǎn)連接，所得曲線一般呈S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中央較呈直線的部分是理想的檢測(cè)區(qū)域。

測(cè)定小分子量物質(zhì)常用競(jìng)爭(zhēng)法，其標(biāo)準(zhǔn)曲線中吸光度與受檢物質(zhì)的濃度呈負(fù)相關(guān)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的形狀因試劑盒所用模式的差別而略有不同。注意圖中橫坐標(biāo)為對(duì)數(shù)關(guān)系，這更有利于測(cè)定系統(tǒng)的表達(dá)。

1、血清

血清是常用于ELISA檢測(cè)的一類樣本，處理也比較簡(jiǎn)單。

用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管采集血液標(biāo)本，將試管或離心管室溫放置2小時(shí)或4℃過夜，使血清析出。(將試管或離心管傾斜放置，使液面橫截面增大，能使血清更大程度的析出。)4℃1000×g離心20分鐘，仔細(xì)收集上清。建議將血清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。

ELSIA試劑盒采血過程中應(yīng)避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞裂解時(shí)會(huì)釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì)，在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測(cè)中會(huì)有非特異性的顯色，而導(dǎo)致檢測(cè)的不準(zhǔn)確性。同時(shí)也應(yīng)避免細(xì)菌污染，因?yàn)榫w內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測(cè)的假陽(yáng)性。

2、血漿

用含抗凝劑的采血管或離心管采集血液標(biāo)本，標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃1000×g離心15min，取上清即血漿。將上清分裝多份，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。

常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等，檢測(cè)時(shí)還應(yīng)仔細(xì)閱讀試劑盒說明書，檢查試劑盒是否對(duì)抗凝劑有特殊要求。

3、細(xì)胞培養(yǎng)上清

取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管，1000×g離心20min，除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì)，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反復(fù)凍融。

4、細(xì)胞裂解液

2)收集細(xì)胞懸液，1000×g離心10min，棄去培養(yǎng)基，ELSIA試劑盒用預(yù)冷的PBS潤(rùn)洗3次。