ELISA試劑盒加樣時出現氣泡的原因

  通常氣泡都是聚集在ELISA試劑盒酶標板的孔周圍，導致孔中液體不能與孔壁有效接觸，使孔內反應不均一。很多說明書、教科書上也都提到，加樣時要避免出現氣泡，這到底是什么原因呢?因為在做實驗的過程中，有時為了打干凈槍頭里面的液體，很容易產生氣泡，是不是這樣對實驗結果會后什么影響?

  1.通常氣泡都是聚集在酶標板的孔周圍，導致孔中液體不能與孔壁有效接觸，使孔內反應不均一。

  2.包被時有氣泡的話，將導致包被不完全實際包被量下降--弱陽性甚至假陰性。

  3.封閉時有氣泡的話，將導致大量未結合位點的存在，引起非特異性結合--本底增高，假陽性。

  4.加樣時有氣泡的話，抗原抗體不能有效的結合--弱陽性甚至假陰性。

  5.加二抗時有氣泡的話，抗原抗體不能有效的結合--弱陽性甚至假陰性(競爭法相反----假陽性)。

  6.加顯色液時有氣泡的話---顯色不完全。

  7.加終止液時有氣泡的話(1、不能完全終止反應 2、影響酶標儀比色，OD值增高)

  8.洗滌時有氣泡的話，非特異性結合物不能完全洗去，做無用功。

  避免方法：

  1、加樣時盡量靠近孔底(不要接觸孔底)，用力均勻，不要過快過猛。

  2、封閉時一定要加滿孔，

  3、洗滌時一定要加滿孔(重要)，氣泡會浮上來*終驅除。手工洗板時一定要吸干水分并用力拍干。

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