1，試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。
2，實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
3，不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。
4，使用一次性的吸頭以免交叉污染，避免使用帶金屬部分的加樣器。
5，使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6，洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。
8，嚴(yán)格按照說明書的操作方法進(jìn)行操作。說明書以英文說明書為主

操作時(shí)注意事項(xiàng)：
1.不同廠家生產(chǎn)的試劑盒因生產(chǎn)工藝和操作方法略有不同，務(wù)必按照所用試劑盒嚴(yán)格操作，否則容易產(chǎn)生檢測(cè)結(jié)果的不確定性.
2.若不同批號(hào)人ELISA試劑盒的不同組分(A液或酶工作液)，或不同試劑的不同組分進(jìn)行交叉使用，有可能出現(xiàn)顯色淺或本底高，花板等情形。
3.反應(yīng)時(shí)間的誤差，做大量標(biāo)本時(shí)，一孔和后一孔以及一些特殊標(biāo)本可能影響較大。
4.臨界值附近標(biāo)本波動(dòng)為正常現(xiàn)象，任何試劑均不可避免?？梢钥紤]將標(biāo)本做奇數(shù)次復(fù)檢。
5.加樣時(shí)樣品量誤差，對(duì)于陰或很陽的標(biāo)本影響不大，但對(duì)閾值附近的標(biāo)本影響大，建議校對(duì)加樣器。


兔胎盤生長(zhǎng)因子(PLGF)ELISA試劑盒使用說明書流程如下：
（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。