人白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒操作步驟，產(chǎn)品用途：用于測定血清、血漿、組織及相關(guān)液體樣本中的含量或活性。

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中文名：人白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒
英文名稱：Human Interleukin 1 receptor antagonist, IL-1ra ELISA KIT
供應(yīng)商：上海古朵
規(guī)格：48t/96t
保存：2~8℃
有效期：6個月
使用范圍：僅供科研使用，不得用于臨床。
產(chǎn)品用途：用于測定血清、血漿、組織及相關(guān)液體樣本中的含量或活性。


人白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒操作步驟 ：
1、加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50?l，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40?l，然后再加待測樣品10?l（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
2、溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
3、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
4、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復5次，拍干。
5、加酶：每孔加入酶標試劑50?l，空白孔除外。
6、顯色：每孔先加入顯色劑A50?l，再加入顯色劑B50?l，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
10 分鐘.
7、終止：每孔加終止液50，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
8、測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。


◆可逆性：
抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復合物的過程是一種動態(tài)平衡，其反應(yīng)式為：
Ag+Ab→Ag·Ab
抗體的親和力（affinity）是抗原抗體間的固有結(jié)合力，可以用平衡常數(shù)K表示：
K=[Ag·Ab]／[Ag][Ab]
◆適比例：
在恒定量的抗體中加入遞增量的抗原形成抗體復合物（沉淀）的量。曲線的高峰部分是抗原抗體比例合適的范圍，稱為等價帶。在等價帶前后分別為抗體過剩帶和抗原過剩帶。如果抗原或抗體度過剩，則無沉淀物形成，在免疫測定中稱為帶現(xiàn)象。抗體過量稱為前帶，抗原地過量稱為后帶。在用免疫學方法測定抗原時，應(yīng)使反應(yīng)系統(tǒng)中有足夠的抗體量，否則測得的量會小于實際含量，甚至出現(xiàn)假陰性。


人白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒操作步驟 注意事項：
1,封閉中的蛋白會非特異性將ELISA板子中沒有結(jié)合包被物的位點封閉掉,這樣之后加入的抗原或者抗體就不會再和板子發(fā)生非特異性的結(jié)合.使ELISA的結(jié)果更加的準確品
2，固相載體的選擇：許多物質(zhì)可作為固相載體，目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
3，包被抗體的選擇：將抗體（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，蛋白質(zhì)包被的適濃度需進行滴定然后觀察陽性標本的OD值。
4，酶標記抗體工作濃度的選擇：先用直接ELISA法進行初步效價的滴定，然后再固定其它條件，后在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
5， ELISA試劑盒酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，如 TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。



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